腫瘤細胞培養實驗報告

(一) 實驗目的、?
1) 學習細胞傳代知識
2) 掌握細胞傳代
3) 進行細胞傳代

(二) 方法與材料、
8 s# [& n3 i7 }5 d, R; u1. 所用細胞：卵巢癌細胞HO-8910 HO-8910PM 4 Y, z8 k/
2. 試劑：0.25％胰酶、1640培養基（含10％小牛血清） ) e1 C1
3. 儀器和器材：倒置顯微鏡，培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等

(三) 步驟、
1. 吸除培養瓶內舊培養液。
2. 向瓶內加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許，以能覆滿瓶底為限。
3. 置溫箱中2~5分鐘，當發現細胞質回縮，細胞間隙增大后，立即終止消化。
4. 吸除消化液，向瓶內注入培養液數毫升，輕輕轉動培養瓶，把殘余消化液沖掉。注意加培養液沖洗細胞時，動作要輕，以免把已松動的細胞沖掉流失。
5. 用吸管吸取營養液輕輕反復吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。
6. 把細胞懸液吸取部分裝入新培養瓶中，置溫箱中培養。
細胞培養的一般過程
準備工作
　　準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試等;
取材;
在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的**培養稱為原代培養。理論上講各種動物和人體內的所有組織都可以用于培養，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養，分化程度低的組織比分化高的容易培養，腫瘤組織比正常組織容易培養。取材后應立即處理，盡快培養，因故不能馬上培養時，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養液中保存。取組織時應嚴格保持無菌，同時也要避免接觸其他的有害物質。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。
培養%
將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養，則直接將組織塊接入培養器皿底部，幾個小時后組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培養，一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量（以每毫升細胞數表示）接入培養器皿并直接加入培養基。細胞進入培養器皿后，立即放入培養箱中，使細胞盡早進入生長狀態。
正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無污染，培養基的PH 是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對培養溫度和CO2 濃度也要定時檢查。
一般原代培養進入培養后有一段潛伏期（數小時到數十天不等），在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過了潛伏期后細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底后要進行傳代培養，將一瓶中的細胞消化懸浮后分**兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。培養正在生長中的細胞是進行各種生物醫學實驗的良好材料。
凍存及復蘇;
為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細胞收集**凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養基，以一定的冷卻速度凍存，**終保存于液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。
復蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內迅速融解。然后將細胞轉入培養器皿中進行培養。
凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

(四) 結果、
細胞傳代培養照片如下：